Жизнь мужского Житенного монастыря (в нынешнее время – женского) - это история длиною в три столетия. Череда бесконечных испытаний, стремление выжить в нелегкое время, сохранить первозданный облик святости и преданности Богу сопровождает обитель с начала ее основания, которое, согласно летописи, было положено в 1716 году.
Мужской Житенный монастырь получил свое название благодаря одному из островов озера Селигер. С древних времен на этом острове находились житницы, куда управление Патриаршего двора ссыпало хлебные запасы, собиравшиеся с жителей города Кличен, который располагался поблизости, на острове Кличен. На острове Житном уже тогда была построена первая церковь. В XIV-XV веках эта церковь была сожжена, и только место, где она стояла, оставалось в памяти осташковских жителей и слыло под названием "Старого церковища".Она пережила пожары дважды, и после очередного пожара ее больше не возобновляли.
Сами осташковцы, не обращая внимание на указы, продолжали заботиться о церкви и благоустраивать ее. После создания нового, дополненного, иконостаса они попросили в Санкт-Петербурге у местоблюстителя патриаршего престола, Рязанского митрополита Стефана разрешение на освящение церкви. Митрополит сразу дал свое согласие, но, несмотря на это, процесс освящения храма шел очень медленно.
Крепость имела четверо ворот, трое из которых выходили на озеро. На стенах крепости стояло 16 башен, самой основной была Большая городская башня, через которую проходила "проезжая дорога". На этой башне находилась особо чтимая Смоленская икона Божьей Матери Одигитрии, которая благодатно покровительствовала городу, особенно в бедственные времена. Эта икона считалась небесной покровительницей Осташкова. После пожара в крепости в 1711 году, истребившего все сооружение, икону нашли в пепле абсолютно невредимой, и лишь незначительные ожоги напоминали о произошедшем. Осташковцы очень дорожили своей святыней, и для нее было решено построить часовню на Главной улице, близ того места, где она находилась прежде.
Благодаря усердным стараниям жителей Осташкова церковь быстро строилась и благоустраивалась. Когда, наконец, она была готова, священник Леонтий построил себе близ нее келью и стал там проживать. Постепенно к новому храму стали приходить монахи из разных монастырей, которые, как и Леонтий, селились рядом и вели церковную службу. Эти поселения и положили начало мужской обители на Житном острове озера Селигер.
После возведения церкви в честь Смоленской иконы Божьей матери, а также "самовольного" появления монашеской общины на Житном острове монастырь не раз сталкивался с серьезными "затруднительными обстоятельствами", грозившими его упразднением. После закрытия обители в 1929 году там был открыт молочный завод. Все помещения были переделаны под кабинеты, цехи и склады, и лишь купола храмов напоминали о том, что здесь когда-то был монастырь. Большая часть утвари и икон была разграблена, и лишь чудом сохранившаяся икона Смоленской Богоматери Одигитрии XVII века была найдена одной из прихожанок храма Житенного монастыря.
Осташковский Житенный монастырь был открыт 17 июля 2002 года, в день памяти царственных мучеников, по благословению архиепископа Тверского и Кашинского Виктора и Священного Синода.